Биохимические и молекулярные маркёры
Для определения генотипов родительских линий и в потомствах их гибридов проводим анализ изозимных локусов, согласно методам, описание которых приведено в публикации (Priyatkina et al., 1994). Процедуры кратко сводятся к следующему: грубые экстракты молодых листьев разделяем с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с последующим выявлением ферментативной активности. Картирование мей-генов проводится в сотрудничестве с коллегами из Института цитологии и генетики Беларуси (Малышев и др., 2005; 2009; Malyshev et al., 2006). Для этой работы используем выборку микросателлитных маркеров, содержащую геномные SSR-маркеры ржи (Xscm) (Saal, Wricke, 1999), EST-SSR-маркеры ржи (Xscm, Xrems) (Hackauf, Wehling, 2002; Khlestkina et al., 2004) и геномные SSR-маркеры ржи (Xgwm) (Roder et al., 1998). Полимеразную цепную реакцию выполняем по методике Рёдер и др. (Roder et al., 1998) в случае маркеров (Xscm и Xgwm) или Хлесткиной и др. (Khlestkina et al., 2004) для маркеров Xrems. Электрофорез проводим в 6%-ном денатурирующем полиакриламидном геле на автоматическом лазерном флуоресцентном секвенаторе ALFexpress II (Amersham-Pharmacia-Biotech). Размеры фрагментов вычисляем с использованием программы Fragment Analyser 1.02 (Amersham-Pharmacia-Biotech) путем сравнения с внутренними стандартами известного размера.